Vantagens e desvantagens de Western Blot

Western blot , uma técnica analítica utilizada para identificar uma proteína específica numa dada amostra , emprega a capacidade de uma enzima ou um anticorpo primário marcado com fluorescência ao ligar-se ao seu antigénio específico . É um processo de três passos começando com a electroforese em gel , seguida por mancha de membrana e sondagem com anticorpos . Detecção de proteínas pode ser directa ou indirecta , com este último utilizando um anticorpo secundário marcado dirigido contra o primário . Embora aceite como uma técnica de análise de proteínas de rotina , western blot tem limitações, bem como benefícios. Vantagem: Sensibilidade

Um dos maiores argumentos a favor de western blot é a sua sensibilidade . Devido à sua capacidade para detectar menos de 0,1 nanogramas de proteína numa amostra , a técnica pode, teoricamente, servir como uma ferramenta de diagnóstico precoce e eficaz , sentindo a menor resposta imunogênica de um vírus ou de bactérias numa amostra de doente . Um Western blot indirecto adicional baseia-se esta sensibilidade da capacidade do anticorpo secundário para amplificar a intensidade do sinal detectado pelo sistema de imagiologia . Maior sensibilidade significa que menos anticorpos são necessários para o teste, o que reduz os custos de laboratório significativamente
Vantagem: . Especificidade

A técnica de western blot deve a sua especificidade para dois grandes contribuinte fatores. Primeiro, eletroforese em gel classifica uma amostra em proteínas de diferentes tamanhos , carga, e conformação . Este processo é , em si mesma um grande passo para a detecção , como bandas formadas no gel já dar pistas sobre o tamanho da proteína ou polipéptido de interesse . A especificidade da interacção antigénio-anticorpo serve como o segundo factor de grande . Como os anticorpos específicos revela afinidade para proteínas específicas , o processo pode detectar seletivamente a proteína alvo , mesmo em uma mistura de 300 mil proteínas diferentes
Desvantagem: . Prone a resultados falsos ou subjetivos

apesar de sua sensibilidade e especificidade, um western blot ainda pode produzir resultados errados. A resultados falso-positivos quando um anticorpo reage com uma proteína não se destina, que é o que muitas vezes acontece quando um paciente que está sendo testado para o HIV passa a ter a tuberculose ou a uma série de infecções parasitárias. Um falso negativo , por outro lado , pode resultar facilmente se proteínas maiores não têm tempo suficiente para transferir adequadamente à membrana . Blotting e processamento inadequado , muitas vezes produzir enviesada , desvanecido, ou até mesmo várias bandas , fazendo com que os resultados dos testes sujeitos à interpretação do técnico
Desvantagem: . Alto Custo e exigência técnica

O custo de um western blot é um composto dos grandes gastos individuais para anticorpos marcados , analistas qualificados e equipamentos de laboratório . Um processo delicado , western blot exige precisão em todas as etapas para a identificação correta dos componentes de uma amostra. Um pequeno erro na concentração de reagentes ou em período de incubação pode ser desastroso para todo o processo. Finalmente, o equipamento necessário para a detecção e tratamento de imagens - sistemas de detecção a laser quimioluminescente, fluorescente , radioativo, ou - pode ser muito caro para a unidade de média microbiologia

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