Todas as técnicas de blotting começar com eletroforese em gel . O gel é mais ou menos como um rectângulo fina de gelatina . Uma pequena quantidade de uma moléculas biológicas , especialmente preparadas é colocado sobre o gel em uma extremidade e, em seguida um campo eléctrico é aplicado a partir de uma extremidade para a outra . As moléculas preparadas são eletricamente carregadas , de modo que o campo elétrico puxa -los através do gel. Movem-se lentamente através do gel grosso até que o campo está desligado. As moléculas mais leves são puxadas mais rápido e avançar ainda mais , as moléculas mais pesadas levam mais tempo para se mover , para que não torná-lo tão longe.
Usar géis
Na prática, várias amostras diferentes são colocadas espalhados ao longo de uma borda do gel . Após o campo eléctrico é aplicado , as diferentes amostras de espalhar posição para a extremidade oposta do gel . A propagação de cada amostra é chamado de " pista ". A pista terá geralmente algumas bandas correspondentes a diferentes moléculas de pesos diferentes dentro de cada amostra . Existem várias maneiras de tornar as bandas visíveis . Analisando o gel dá biólogos uma idéia do tamanho das moléculas diferentes , mas para obter mais informações , é necessário um método diferente. É aí que entra blotting .
Blotting
Blotting é uma forma de levar as moléculas que foram afastados no gel e torná-los disponíveis para mais análise . Da mesma forma, papel mata-borrão absorve a tinta solta --- ou fez nos dias quando as pessoas usadas canetas --- blotting biológica " absorve " as moléculas do gel em um material diferente. As moléculas acabam com o mesmo padrão , mas agora num papel especial , ou folha de plástico . As moléculas se vinculado à folha de modo que eles não se movem mais, e então eles podem ser embebido em uma solução de outras moléculas sonda que fornecem mais informações sobre as moléculas. Existem várias maneiras diferentes de fazer esses passos , mas o princípio é o mesmo para todos eles.
Sul, do Norte e Western Blotting
O biólogo Edwin Sul foi a primeiro a desenvolver uma técnica de transferência . Ele desenvolveu todos os detalhes necessários para ter a certeza de que a eletroforese em gel de DNA poderia ser transferido com precisão e medidos em material de mata-borrão . Esse método foi nomeado após ele : Southern Blotting . Outros cientistas descobriram como fazer o mesmo trabalho geral técnica de RNA , e --- em estilo típico cientista divertir-se --- chamado seu método detalhado Northern Blotting . Mais tarde , o procedimento foi modificado para medir as proteínas , e foi chamado de Western Blotting . Todas as três técnicas de usar os mesmos princípios : . Medidas do sul de DNA , RNA medidas do Norte, proteínas medidas ocidentais