Mecanismo de Polimerização em SDS Gel

SDS -PAGE é um procedimento cientistas usam para proteínas separadas com base em como eles migram através de um gel. Os geles são feitos de um polímero chamado de poliacrilamida . Quando você faz um gel de poliacrilamida , você começa com uma mistura de produtos químicos : a acrilamida , bisacrilamida , SDS e um produto químico tampão para estabilizar o pH . A adição de um composto de persulfato e outra substância química chamada Temed fará com que a acrilamida para formar longas cadeias ou polimerização . Iniciação

O íon persulfato de persulfato de amônio é o equivalente a dois íons sulfato ligados por uma ligação oxigênio - oxigênio fraco. Este vínculo pode decompor ou quebrar em dois , produzindo radicais sulfato --- moléculas altamente reativas com um elétron não emparelhado . O radical de sulfato pode reagir com a água para gerar um radical hidroxilo , ou pode reagir com o monómero de acrilamida para iniciar a reacção de polimerização . Temed atua como um catalisador que acelera a velocidade com que os íons persulfato formar radicais .
Reação em Cadeia

Depois de uma hidroxila ou radical sulfato formou , ele ataca um monômero de acrilamida , tendo um dos elétrons na ligação dupla. O monómero de acrilamida é agora um radical com um electrão não emparelhado , de modo que passa a atacar um outro monómero de acrilamida de uma forma semelhante . Esta série de eventos cria uma cadeia de rápido crescimento de monômeros de acrilamida ligadas por ligações simples . A reação em cadeia só termina quando dois radicais reagem entre si .
Cross- Linking

Se acrilamida estavam presentes em sua própria , não seria formar o gel espesso que você precisa para o SDS -PAGE. Os polímeros têm de ser reticulada para formar um gel com as propriedades certas , e é aí que bisacrilamida entra. As ligações duplas na bisacrilamida também servir como um alvo para os radicais da reação, e porque tem dois locais onde pode ser atacados por radicais , isto é , em última instância incorporada dois dos polímeros em crescimento. Consequentemente , os polímeros acabar com ligações cruzadas entre eles em locais aleatórios ao longo do comprimento de cada cadeia .
Considerações

A reação de polimerização é muito rápido , então quando você ' Adicionamos o Temed eo persulfato, que terá lugar muito rapidamente. A pureza de seus reagentes é importante porque os contaminantes podem afetar seus resultados. O ácido acrílico , por exemplo , pode ser adicionado ao polímero e cria locais de permuta de iões que pode provocar variações de pH locais no seu gel . O gel resultante ainda pode conter alguns monômero acrilamida e acrilamida é uma neurotoxina , por isso sempre tomar as devidas precauções quando se trabalha com géis SDS.