Tomar quatro tubos de ensaio limpos e medir 100 microlitros de acetato de etilo no primeiro com o seu pipeta. Adicionar 50 microlitros para o segundo , 25 para o terceiro e 5 para o quarto .
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Alterar pontas de pipeta e adicionar água deionizada para cada tubo. Para o primeiro tubo de adicionar 1,8 mL , 1,9 mL , em seguida, para o segundo tubo , de 1,95 mL para o terceiro tubo e 1,6 ml para a quarta . Mexa com a ponta da pipeta para misturar , certificando-se de mudar as pontas das pipetas entre os tubos .
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Transferir 1 mL da mistura em cada tubo para quatro célula limpa . Mais uma vez, certifique-se de mudar as pontas das pipetas entre os tubos .
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Insira o primeiro dos quatro tinas em um , calibrado e espectrofotômetro de absorção inibida medida em 215 nm. Se você não tem certeza de como alterar o comprimento de onda e /ou em branco o espectrofotômetro , consultar as instruções do fabricante ; o procedimento pode variar um pouco , dependendo do dispositivo . Anote o valor que você medir e fazer as medições para o conteúdo dos outros três cuvetes .
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Pegue um funil de separação limpo e certifique-se a torneira ou dreno no final é fechado. Remover a tampa na parte superior .
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Adicionar 2 mL de acetato de etilo , seguido por 15 mL de água e 15 ml de octanol . Se necessário, você pode apoiar o seu funil de separação com um anel em um suporte de anel , enquanto você fazê-lo.
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Retirar o funil de vidro e substituir a tampa . Segure o funil de separação com as duas mãos com uma mão colocada sobre a tampa para ter certeza que não sai . Agitar o funil e para trás algumas vezes. Em seguida, incline -o para trás e abra a torneira para aliviar a pressão . Repita este procedimento até ter abalado o conteúdo para um total de 30 segundos ou menos . Certifique-se sempre agitá-lo uma ou duas vezes e depois aliviar a pressão . Se você permitir que a pressão no interior da câmera , que poderia fazer com que a rolha a sair e liberar todo o conteúdo para o seu banco de laboratório .
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Coloque o funil de separação em um anel ligado a um suporte de anel . Permitir que o conteúdo se separar em duas camadas. A camada superior é octanol ; a camada inferior é a água . Recolher a fase de água e medir a sua absorção na região UV do espectro .
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Coloque um balão pequeno ( ~ 25 mL), sob o funil de separação e drenar alguns mL da camada de água para dentro do Garrafa . Retirar 1 ml do conteúdo do frasco com seu micropipeta e transferi-la para uma tina limpo.
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Coloque a célula para o espectrofotômetro e medir a capacidade de absorção em 215 nm.
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Leve seus dados de absorção e inseri-lo em um programa de planilha como o Open Office ou Excel. Para as amostras de acetato de etilo de quatro preparados no início , introduzir a molaridade de uma coluna e a absorção de uma coluna vizinha . A molaridade para as quatro amostras é como se segue : 100 microlitros de amostra : 0,5091 molar ; Amostra de 50 microlitros : 0,2545 molar ; 25 microlitros de amostra : 0,1273 molar ; e 5 microlitros de amostra: 0,02545 molar
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Use seu programa de planilhas para elaborar um gráfico de dispersão de parcela destes quatro pontos de dados com molaridades ou concentrações no eixo x e absorção do y . . Se você não tem certeza de como fazer isso , consulte o manual do usuário ou no menu Ajuda do seu programa de planilha. Usando o programa de planilhas, atender a uma equação linear ou linha de melhor ajuste da forma y = mx + b para esses dados. A variável x nesta equação é a concentração , enquanto a variável y é a absorção.
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Pegue a absorção do seu 2 mL da amostra de acetato de etilo do funil de separação e dividi-lo pelo m -VALOR a partir da equação o seu programa de planilha calculada e subtrair o valor de b . Se o valor de m é de 1,2 , por exemplo , e o valor de b é de 0,2 , enquanto a capacidade de absorção é 0,42 , a partir de 0,42 a 0,2 subtrair e dividir o resultado por 0,5 para obter uma concentração de 0.183 moles por litro .
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Multiplique seu valor de concentração de 0.015 litros desde que você tinha 10 mL de água em seu funil de separação. Se a sua concentração era 0.183, por exemplo, você iria multiplicar por 0,015 para obter 2,745 x 10 ^ -3 moles de acetato de etilo presente.
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Subtrair o resultado da Etapa 14 de 0,02036 moles de acetato de etilo , que foi o valor que você adicionou originalmente . Se tivesse 2,745 x 10 ^ -3 mole na camada de água , por exemplo , subtrair este número de 0,02036 moles obter 0,01762 moles presentes na camada de octanol .
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Dividir a quantidade presente no camada octanol pela quantidade presente na camada de água , e isso lhe dá o coeficiente de partição do seu líquido. Este exemplo utiliza acetato de etilo , mas você pode usar outros líquidos , desde que você ajustar as concentrações e valores para molarity adequadamente.