Preparar a membrana PVDF limpa e estabiliza a membrana antes da transferência. Antes da secagem , a membrana é & quot ; bloqueados & quot ; para prevenir a ligação de qualquer outra coisa do que os ácidos nucleicos específicos , tais como anticorpos não específicos . Durante este procedimento, você molhar a membrana colocando-o em uma superfície plana coberta de metanol. A membrana muda de cor durante esta frase , de opaco para semitransparente . Uma vez terminado com o banho de metanol , a membrana é colocada em água desionizada de modo a embeber durante aproximadamente dois minutos . A membrana deve então absorver novamente em uma solução de metanol que é altamente ácida .
Conjunto de membranas antes da transferência
Dois dos trabalhos de membrana são embebidas na primeira solução de metanol e colocado sobre uma placa de ânodo . Durante esse processo , você deve verificar cuidadosamente se há bolhas de ar presas , o que poderia comprometer a transferência. Um outro pedaço de papel de filtro embebido em que a segunda solução de metanol e colocado no topo da pilha . Um gel , em seguida, passa por cima da membrana , com o cuidado de não armadilha de bolhas de ar entre a aplicação do gel e da membrana . Três novos pedaços de papel são a seguir imersos em tampão de cátodo e colocada no topo do gel . Se ocorrer qualquer borbulhamento , um tubo de ensaio funciona para suavizar as membranas .
Transferência
Nesta parte do processo , você se conecta alta tensão cordões para uma fonte de alimentação e aplicar uma corrente constante para a área do gel sobre a membrana durante 30 minutos . Os tempos de transferência podem variar em função do tipo de anticorpo . Após 30 minutos , você remove a fonte de alimentação e da membrana de transferência. O canto inferior direito da membrana é então cortada para verificar a orientação . As primeiras duas camadas de papel de filtro são descartados , incluindo o gel . As bandas de peso molecular são marcados com uma caneta esferográfica.
Secagem
Assim que a transferência estiver completa, você secar a membrana em uma de duas maneiras . Para uma secagem mais rápida , a membrana é embebida em 100 por cento de metanol , durante 10 segundos, para remover qualquer água . A membrana em seguida, assenta sobre um pedaço de toalha de papel , durante 15 minutos . Para um método de secagem mais lenta , a membrana é colocada sobre a toalha de papel , sem a adição de metanol . Uma vez seco , a membrana pode ser utilizada ou armazenada em um recipiente seco a 4 graus Celsius para uso futuro.