Coat os poços da placa com o antígeno. Use uma diluição antígeno. Soluções puras de antigénio não são necessários uma vez que apenas cerca de 3 por cento da proteína na amostra é a proteína alvo . Quando a diluição , assegurar que as amostras que contêm o antigénio a uma concentração que se encontra dentro do alcance de detecção do anticorpo . Pipetar a solução de diluição de antigénio para baixo os poços da placa . Algumas placas podem ser pré - revestida com antigénio . Leia as instruções fornecidas com os poços da placa .
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Cubra as placas com uma plástica adesiva e incubar durante a noite. Lavar as placas com soluções tampão , tais como solução salina tamponada com Tris ou tampão fosfato salino . Para lavar , enxaguar as placas utilizando um frasco de pressão cheio com a solução tampão ao longo de um dissipador de laboratório . Pat as placas com uma toalha de papel para remover quaisquer gotas restantes da solução tampão .
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reduzir a ligação não específica de proteínas e de moléculas através de um tampão de bloqueio ou um reagente , tal como um detergente bloqueador , o leite em pó ou de soro bovino . O tipo de reagente de bloqueio utilizado dependerá do ensaio . Adicionar o reagente de bloqueio para os poços com uma pipeta . Cobrir a placa mais uma vez com plástico adesivo e incubar durante a noite .
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re - lavar novamente os poços da placa , utilizando uma solução tampão . Estas etapas vão diminuir a quantidade de ligação não específica que pode ocorrer para os poços da placa , antes de adicionar a solução de anticorpo necessário para o procedimento . Além disso, os reagentes de bloqueio pode ajudar a reduzir as cores de fundo nos resultados dos ensaios .