obter uma placa de células. Lavar a placa duas vezes com 10 ml de PBS ( solução salina tamponada com fosfato ) sem cálcio e magnésio . Adicionar 2 ml de destacador ( tripsina ) . Incubar a placa durante três minutos a 37 graus Celsius . Observar a placa com o microscópio, para assegurar que as células têm destacado . Suavemente mover a placa para retirar todas as células a partir da parte inferior da placa . Adicionar 10 ml de HEK ( keratinocyctes epiderme humana) e FCS ( soro de vaca fetal) médio. Use uma pipeta de 10 mililitros para mover as células para cima e para baixo.
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Observe as células ao microscópio para garantir que eles são células individuais. Pipeta utilizando a pipeta 10 mililitros até que as células são simples , se necessário . Centrifuga-se as células durante dois minutos a 1.000 rotações por minuto . Desprezar o sobrenadante . Colocar as células em 10 ml de soro fetal de vitelo . Centrifuga-se as células mais uma vez durante dois minutos a 1.000 rotações por minuto . Desprezar o sobrenadante . Coloque as células em 200 microlitros de solução de gravação externa. Observe as células ao microscópio de células individuais com uma membrana lisa.
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Coloque a solução salina em seu interior um chip de patch-clamp . Adicionar uma gota de solução de electrólito intracelular para a parte inferior do chip usando uma pipeta . Montar o chip em uma tampa de rosca . A tampa de torção deve conter o eletrodo de referência e linha de sucção. Adicionar uma gota de solução de electrólito extracelular para o topo do chip usando uma pipeta . A solução eletrolítica permite o chip para fazer contato com o eletrodo. Adicionar 5 microlitros de suspensão de células com a solução salina no chip . A posição de uma única célula utilizando sucção através de uma pipeta . Sucção pode ser realizada manualmente por sucção de ar através da pipeta . Posicionando a resistência aumenta de células para formar uma vedação . O selo permite a investigação de toda a célula .