Atividade basal do Promotor SP6

experimentos in vitro são aqueles realizados fora de um organismo vivo em um tubo de ensaio ou ambiente similar. Os cientistas podem fazer cópias de RNA ou transcritos de um gene in vitro através de um processo chamado de transcrição in vitro . A enzima que faz com que o transcrito de ARN baseada no gene é chamado de uma polimerase de ARN . Uma tal molécula é a polimerase SP6 . Ele requer um trecho de DNA denominado promotor SP6 , a fim de funcionar corretamente. Promotores

Um promotor é a região de ADN ligado por uma ARN-polimerase para iniciar a transcrição . A polimerase de SP6 requer que uma sequência muito específica estar presente no promotor de modo a ligar-se , por isso, quando a polimerase de SP6 é utilizado para a transcrição in vitro , o gene deve conter o promotor de SP6 para transcrição ocorra. A polimerase de SP6 é de um tipo de vírus chamado um bacteriófago ; empresas de biotecnologia produzir esta polimerase de infectar bactérias Salmonella com o fago e subsequentemente isolando a polimerase .
Expressão

expressão ou actividade basal refere-se ao nível de expressão na ausência de outras moléculas que vão aumentar ou diminuir o nível de transcrição . Activadores ou repressores , por exemplo , são proteínas que se podem ligar ao promotor ou a outras regiões reguladoras de genes e qualquer auxiliar no recrutamento de RNA polimerase ou impedi-la de se ligar . Indutores são moléculas que aumentam a produção do produto do gene , aumentando os níveis de expressão .
SP6

A actividade basal para o promotor SP6 irá variar dependendo das condições de sua experiência. O mais importante , é claro, é a forma como suas condições experimentais podem afetar a atividade e como SP6 compara a outros sistemas. Em geral , a polimerase SP6 e promotores entregar uma eficiência mais baixa do que a T7 ou T3 sistemas de transcrição in vitro , embora sob condições ideais SP6 é mais ou menos semelhante a esses outros dois. Como SP6 , tanto T7 e T3 usar uma RNA polimerase do bacteriófago .
Condições

a concentração ea temperatura de sal são dois fatores importantes na determinação da atividade basal. SP6 é muito sensível à concentração de sais , de modo que as concentrações mais elevadas do sal podem reduzir significativamente a sua actividade . Tudo o mais permanecendo igual , a expressão é significativamente maior em 104 graus Fahrenheit que em 99 graus Fahrenheit. Concentração Nucleotide é outra consideração importante . As baixas concentrações pode causar transcrição de encerrar prematuramente e, assim, diminuir a sua eficiência. Aumentando a concentração de nucleótidos irá evitar este problema . Se você está sintetizar sondas de RNA , no entanto, acrescentar muito nucleotídeo unlabelled vai diminuir a quantidade de nucleótido marcado no produto final.