A lei de Beer- Lambert , que afirma que a absorvância é proporcional ou tem uma relação linear com a concentração das espécies que absorvem , só é verdade para densidades ópticas abaixo de 0,4. No entanto , as amostras com densidade óptica superior a 0,4 pode ser diluída por um factor de diluição definidos e as suas densidades ópticas medido . Se os valores medidos são divididos pelo factor de diluição , para produzir a densidade óptica corrigida , este novo valor é proporcional ao número de células na amostra .
Espectrofotómetro
a densidade óptica é medida por um instrumento , conhecido como um espectrofotómetro , que compara o brilho da luz emitida a partir de duas fontes , uma das quais tem certas características comuns. Conforme a luz passa através de uma suspensão de células , a luz é dispersa pelas células de forma a que menos de que ele atinja uma célula fotoeléctrica - um dispositivo electrónico cuja saída eléctrica varia em função da força da luz que incide sobre ele - dentro do espectrofotómetro . Assim, quanto maior o número de células na suspensão o mais fraco da produção elétrica da célula fotoeléctrica e vice- versa.
Optical Density Correção
óptica densidades acima de 0,4 , os graus em que as células podem ser sombreadas por outras células ou refletir a luz muitas vezes é apreciável. Em densidades ópticas mais altas , a densidade óptica corrigida de suspensões de células não é directamente proporcional ao número de células . No entanto , a densidade óptica corrigida de suspensões de células diluídas é quase proporcional às suas densidades relativas conhecidas com precisão - a relação das suas densidades que a de uma substância de referência , tal como a água - de modo que é uma hipótese de trabalho razoável que a densidade óptica corrigida de uma suspensão de células altamente diluída é , de fato, a sua verdadeira densidade óptica .
densidade Óptica relativa
multiplicando o valor da densidade relativa de qualquer suspensão de células pelo básico o valor da densidade óptica obtidos a partir da suspensão de células altamente diluído , é possível obter a densidade óptica corrigida . No entanto, para fazer a medição mais precisa possível , o valor básico densidade óptica deve ser obtido a partir de várias leituras espectrofotômetro .