Métodos para um Sistema de levedura Três Híbrido

replicação de cromossomos , processamento de RNA mensageiro, tradução de proteínas , e as decisões críticas em estágios iniciais de desenvolvimento dependem da interação de DNA, RNA e proteínas. Essas interações são os processos biológicos básicos da expressão gênica e síntese protéica. Cientistas usam frequentemente Saccharomyces cerevisiae , da mesma espécie de levedura usado no cozimento e de cerveja , para estudar os genes que codificam para proteínas específicas e analisar as interacções entre proteínas e outras moléculas . A levedura sistema de três híbridos é um dos três variantes do sistema de leveduras duplamente híbrido usado para estudar estas interacções . O Sistema de Dois Híbridos

O método de dois híbridos é usado para detectar interacções proteína-proteína , olhando para a expressão de um gene repórter . Muitas proteínas têm , pelo menos, dois domínios ou unidades estruturais e funcionais discretos . GAL4 , uma proteína encontrada em Saccharomyces cerevisiae , tem um domínio de ligação de DNA ( DBD ) e um domínio de activação ( AD ) . Neste método , uma proteína híbrida é fundida com o DBD e um segundo para o AD . Nenhum gene repórter é expresso pela fusão de apenas um dos híbridos . Uma vez que o gene GAL4 repórter só se expressa quando ambos os híbridos estão presentes , a interação proteína-proteína é indicado .
O sistema de três híbrido

O método identifica três híbridos um gene repórter para detectar a interacção da proteína com o RNA . A primeira proteína híbrida consiste numa DBD fundido directamente com um domínio de ligação ao ARN . O segundo consiste na AD do factor de transcrição de GAL4 ligado a uma proteína de ligação a ARN . Os domínios de ligação de ARN interage com uma molécula híbrida de ARN que se liga as duas proteínas híbridas , para formar um complexo . Formação do complexo desencadeia a expressão do gene repórter de GAL4 . Uma vez que o gene repórter só é ativada por a formação do complexo de três híbridos , a sua presença indica a interação de RNA e proteínas.
O Sistema One -Hybrid

o método de um híbrido é utilizado para detectar a interacção da proteína com ADN . Um sistema de um híbrido combina uma única proteína , que liga a AD diretamente ao DBD . Em vez de se identificar um gene repórter , este método de procura por uma proteína específica que tem de reconhecer uma sequência alvo de ADN . A presença da proteína específica indica a interação da proteína com o DNA .
O Sistema One-Two híbrido

O one-two método híbrido é usado para estudar a proteína - proteína e proteína-DNA interacções simultaneamente. Usando as estirpes de levedura recentemente desenvolvidos , este método emprega o gene GAL4 repórter para identificar interacções proteína-proteína e um consenso da p53 para identificar a interacção ADN- proteína . O método deverá aumentar significativamente a precisão dos resultados experimentais , reduzindo a ocorrência de falsos positivos obtidos em outros sistemas híbridos .