Como crescer Células apicoplast um parasita em uma Cultura

Apicoplasts são um tipo de organela intracelular presente em parasitas unicelulares que causam doenças graves como a malária , toxoplasmose e coccidiose. Organelas são estruturas complexas dentro de uma célula que não podem crescer e se reproduzir por si mesmos. Eles surgiram quando um ancestral dos parasitas engolido um outro organismo , o que provavelmente estava relacionado com algas vermelhas . Porque apicoplasts não são células independentes , que não podem ser cultivadas em cultura por si sós . Para cultivá-las é preciso crescer os parasitas . O que se segue são as instruções para a cultura do estágio de glóbulos vermelhos do Plasmodium falciparum , que causa malaria.Things você precisa fotografia stock Parasite
RPMI 1640 cultura
capela de fluxo laminar
Autoclave
Albumax substituto soro II
D- glicose
hipoxantina
HEPES
sulfato de gentamicina
frascos de cultura
incubadora celular
Os glóbulos vermelhos
Show Mais instruções
cultivar Plasmodium falciparum
1

Defina a incubadora célula para 37 graus Celsius e ajustar a composição do gás de 1 por cento de oxigênio , 3 por cento do dióxido de carbono , e 96 por cento de nitrogênio .
2

Autoclave todos os equipamentos e materiais não esterilizados
3

Trabalhar na capela de fluxo laminar para manter a esterilidade , preparar o médio final , adicionando o seguinte ao meio de cultura RPMI 1640 :

D - glucose para uma concentração final de 20 mM .

hipoxantina para uma concentração final de 0,2 mM .

HEPES até uma concentração final de 25 mM .

sulfato de gentamicina até uma concentração final de 25 mg /L.

Albumax II a uma concentração final de 0,5 por cento w /v
4

Distribuir a quantidade total de meio realizada em etapa anterior em tantos frascos de cultura como desejava e colocá-los no agitador na incubadora.
5

Uma vez que o médio chegou a 37 graus Celsius , adicione o caldo de parasita.
6

Altere o meio de cultura todos os dias para manter os parasitas bem alimentados e vivos.
7

Adicione células vermelhas do sangue a cada dois dias . Eles serão infectadas pelos novos parasitas que estão a ser gerados na cultura . Se eles se tornarem demais para um frasco , divide seu conteúdo em dois ou mais adicionais queridos.